Dewetting孔去濕現(xiàn)象

      在方法開發(fā)時(shí)需要考慮的一個(gè)重要因素就是固定相的“孔去濕”。當(dāng)固定相為高疏水（如C18），且流動(dòng)相從一個(gè)高有機(jī)相組分（>40%乙腈或甲醇）變到另一個(gè)純水相或高水相組分的時(shí)候，就容易發(fā)生。這也是早期反相色譜柱常常遇到的問題。

      色譜柱在高壓條件下，流動(dòng)相中的水會(huì)被“壓入”起保留作用的固定相孔結(jié)構(gòu)里；當(dāng)泵停止后，水則不會(huì)再進(jìn)入固定相孔內(nèi)。同時(shí)，由于固定相是疏水的，滯留于色譜柱中的水被從固定相孔結(jié)構(gòu)中排出。在重啟色譜泵后，即使是高壓也無法使流動(dòng)相中的水重新回到固定相孔內(nèi)，從而導(dǎo)致樣品的保留時(shí)間迅速變短，分離度明顯下降。

      暫無研究表明純水/高水會(huì)導(dǎo)致碳鏈倒塌，孔去濕的主要原因填料孔表面的疏水性。發(fā)生孔去濕現(xiàn)象的色譜柱，在經(jīng)過40%以上有機(jī)溶劑長時(shí)間沖洗后，是可以恢復(fù)的。

      孔去濕現(xiàn)象的發(fā)生跟填料孔徑、鍵合密度和鍵合相都有關(guān)系，除了HALO C18，HALO其他所有固定相都能在水相條件下使用，不會(huì)發(fā)生“孔去濕”現(xiàn)象。

      下方圖M演示了當(dāng)HALO C18發(fā)生“孔去濕”現(xiàn)象時(shí)色譜峰的變化。相比之下，HALO AQ-C18所具有的極性特征會(huì)保護(hù)它防止發(fā)生“孔去濕”現(xiàn)象，如圖 M 所示，泵重啟前后，HALO AQ-C18的保留和分離基本保持不變。